การสกัดเอนไซม์เพอร์ออกซิเดสและทำให้บริสุทธิ์จากผักกระเฉดน้ำ
คำสำคัญ:
การสกัด, การทำให้บริสุทธิ์, เพอร์ออกซิเดส, ผักกระเฉดน้ำ, กิจกรรมของเอนไซม์สูงสุดบทคัดย่อ
เอนไซม์เพอร์ออกซิเดสเป็นเอนไซม์ที่มีการนำมาใช้ประโยชน์ในหลากหลายด้านไม่ว่าเป็นด้านการแพทย์ เกษตรกรรม หรืออุตสาหกรรม ซึ่งเอนไซม์เพอร์ออกซิเดสสามารถพบได้ทั้งในสัตว์ พืช และจุลินทรีย์ ปัจจุบันมีการประยุกต์ใช้เอนไซม์
เพอร์ออกซิเดสจากรากของฮอร์ทเรดิชที่นําเข้าจากต่างประเทศทำให้มีค่าใช้จ่ายสูง งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อหาเอนไซม์เพอร์ออกซิเดสจากผักกระเฉดน้ำ ผักท้องถิ่นของประเทศไทย โดยแยกส่วนในการศึกษา 4 ส่วน (ใบ ลำต้น นมและราก) สกัดโดยใช้ 20 mM Tris-HCl buffer, pH 7.2 ที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากนั้นนำเอนไซม์มาแยกหาความบริสุทธิ์โดยใช้ความเข้มข้นของ NaCl ที่ 0.0 M และ 0.1 M ใน 20 mM Tris-HCl pH 7.2 ด้วย DEAE-Sepharose column และหาน้ำหนักโมเลกุล โดยวิธี SDS-PAGE ผลการศึกษาพบว่า มีเพียงส่วนประกอบของผักกระเฉดน้ำบริเวณใบและลำต้นเท่านั้นที่พบ activity ของเอนไซม์เพอร์ออกซิเดส โดยจะพบกิจกรรมของเอนไซม์เพอร์ออกซิเดสมากที่สุด ที่ 0.0 M NaCl และพบว่าน้ำหนักโมเลกุลของเพอร์ออกซิเดสในรูปแบบซับยูนิตเดี่ยวเท่ากับ 32.3 ± 2 kDa (n=5) นอกจากนี้ยังพบเอนไซม์แสดงออกถึงกิจกรรมของเอนไซม์สูงสุด เมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์จากเงาะ ต้อยติ่ง และผักบุ้งไทย ในปริมาณ 5 กรัมเท่ากันที่ตีพิมพ์เผยแพร่มาก่อนหน้านี้ถึง 50-5,000 เท่า เอนไซม์เพอร์ออกซิเดสที่สกัดได้จากผักกระเฉดน้ำเป็นการพบ “กิจกรรมของเอนไซม์สูงสุด” (perfect total activity enzyme)
Downloads
References
ฐิติกร พรหมบรรจง, ธนากรณ์ ดำสุด, และ สุวรรณา ผลใหม่. (2562). การศึกษาและทำบริสุทธิ์เอนไซม์เปอร์ออกซิเดสบาง
ส่วนที่สกัดจากเปลือกแตงโม และการทดสอบประสิทธิภาพในการสลายสีย้อม. วิจัยทุนสนับสนุน มหาวิทยาลัย เทคโนโลยีราชมงคลศรีวิชัย.
Chauhan V., Kumari V., & Kanwa. (2020). Comparative Analysis of Amino acid Sequence Diversity and Physiochemical Properties of Peroxidase Superfamily. Journal of Protein Research & Bioinformatics, 2(1), 1-8.
ปนัดดา แย้มเกตุ. (2530). การศึกษาความแตกต่างระหว่าง peroxidase isozyme ของสายพันธุ์ถั่วเขียวที่คัดเลือกจาก สายพันธุ์ VC 1973 A. (วิทยานิพนธ์ปริญญาตรี). มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์, กรุงเทพฯ.
พัชรากร รัตนภูมี. (2542). เอนไซม์เปอร์ออกซิเดสในใบยางพารา. (วิทยานิพนธ์วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต). มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์, สงขลา.
Alyas, F., & Zia, M. A. (2002). Extraction and Purification of Peroxidase from Soybean Seeds. Pakistan Journal of Agricultural Sciences (Pakistan), 39(4), 326-329.
ชื่นสุมณ ยิ้มถิน และ สาโรจน์ ยิ้มถิน. (2555). การเปรียบเทียบปริมาณเอนไซม์เปอร์ออกซิเดสจากต้อยติ่งและผักบุ้งไทย. สถาบันวิจัยและพัฒนา มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลสุวรรณภูมิ.
Zia, M. A., Kousar, M., Ahmed, I., Iqbal, H. M. N., & Abbas, R. Z. (2011). Comparative Study of PeroxidasePurification from Apple and Orange Seeds. African Journal of Biotechnology, 10(33), 6300-6303.
พืชเกษตร. (2559). ผักกระเฉด (water mimosa). สืบค้นจาก https://link.bsru.ac.th/ioq
วีระ ปิยธีรวงศ์. (2563). หลักการและการประยุกต์ใช้เทคโนโลยีเอนไซม์. โรงพิมพ์มหาวิทยาลัยขอนแก่น.
Sambrook, J., Fritsch, E. F., & Maniatis, T. (1989). Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) (2 ed., Vol. 3). Cold spring harbor laboratory press.
Desjardins, P., Hansen, J. B., & Allen M. (2009). Microvolume Protein Concentration Determination Using the NanoDrop 2000c Spectrophotometer. Journal of Visualized Experiments, 33, 1-14.
Miranda, V. M., Lahore, F. H., & Cascone O. (1995). Horseradish peroxidase extraction and purification by aqueous two-phase partition. Applied Biochemistry and Biotechnology, 53(2), 147-154.
Mohamed, I., Khonezy, E., Ahmed M. A., Mahmoud, F. D., Afaf, S. F., & Saleh A. M. (2020). Purification and Characterization of Cationic Peroxidase from Ginger (Zingiber Officinale). Bulletin of the National Research Centre, 44(11), 2-9.
Khatun, S., Ashraduzzaman, M., Karim, M. R., Pervin, F., Absar, N., & Rosma, A. (2012). Purification and Characterization of Peroxidase from Moringa Oleifera L. Leaves. Bioresources, 7(3), 3237-3251.
Hu, Y., Wu, J., Luo, P., & Mo, Y. (2012). Purification and Partial Characterization of Peroxidase from Lettuce Stems. African Journal of Biotechnology, 11(11), 2752-2756.
Nadaroglu, H., Çelebi, N., Demir, N., & Demir, Y. (2013). Purification and Characterization of a Plant Peroxidase from Rocket (Eruca vesicaria sbsp. Sativa) (Mill.) (syn. E. sativa) and Effects of Some Chemicals on Peroxidase Activity in Vitro. African Journal of Agricultural Research, 8(21), 2520-2528.
Kvaratskhelia, M., Winkel, C., & Thorneley, R. N. (1997). Purification and Characterization of a Novel Class III Peroxidase Isoenzyme from Tea Leaves. Plant physiology, 114(4), 1237-1245.
สมบัติ คงวิทยา, อริสรา อรกุล, เบญจวรรณ ช่อชู, ปณิตา วงษ์คำ, ชัยศาสตร์ คเชนทร์สุวรรณ, สมเกียรติ พรพิสุทธิมาศ, และคณะ. (2553). การตรวจหาแอคทิวิทีของเอนไซม์เพอร์ออกซิเดสในผลเงาะ. วารสารหน่วยวิจัยวิทยาศาสตร์เทคโนโลยีและสิ่งแวดล้อมเพื่อการเรียนรู้, 2(2), 97-101.
เผยแพร่แล้ว
How to Cite
ฉบับ
บท
License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
